胱抑素CElisa試劑盒測定的常用模式--固相捕獲法測IgM抗體
胱抑素CElisa試劑盒在病原體急性感染的診斷中,通常需檢測IgM抗體,如急性甲型肝炎診斷的血清抗HAVIgM檢測、急性乙型肝炎病毒感染的血清抗HBc lgM檢測和TORCH項(xiàng)目的系列IgM檢測等。IgM抗體也有使用間接法測定的,如目前在市場上可見到的有些TORCH系列的IgM檢測試劑盒。在使用間接法測IgM抗體時,由于臨床血清樣本中含有高濃度的IgG抗體,其中部分特異IgG抗體將與IgM抗體競爭與固相抗原結(jié)合,從而干擾IgM抗體的檢測。
因此,在使用間接法測定IgM抗體時,通常須將血清樣本用抗人IgG抗體或SPA預(yù)處理,以去除IgG的干擾。這樣不但測定較為繁瑣,而且影響測定的特異性和靈敏度。目前,常用的IgM抗體檢測方法為捕獲法,即以抗人IgM抗體(抗人u鏈)作為固相抗體,當(dāng)加入血清標(biāo)本時,其中的IgM類抗體(特異的和非特異的)即可被固相抗體捕獲,再加入特異抗原,其與固相上捕獲的IgM抗體結(jié)合后,加入酶標(biāo)抗特異抗原的抗體,zui后加入底物顯色。具體操作步驟如下:
1.首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗體,洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗體后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉,洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。
2.加入含待測IgM抗體的臨床樣本如血清等,溫育一定時間后洗板;此時,待測樣本中的IgM抗體就會與固相上的抗P鏈抗體反應(yīng)而吸附于固相上。
3.加入特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等,溫育一定時間后洗板;此時,特異抗原就會與固相上的特異IgM抗體發(fā)生反應(yīng)。
4.加入酶標(biāo)記的抗特異抗原的抗體,溫育一定時間后洗板;此時,在固相上即形成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物。
5.胱抑素CElisa試劑盒加入酶底物,溫育顯色測定。
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胱抑素CElisa試劑盒
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