綜合微生物的培養(yǎng)方法,包括以下步驟:
(1)前期準備:(A)滅菌處理;(B)制備Biolite水;(C)檢查設備和材料;
(2)按比例配制培養(yǎng)材料;
(3)導入曝氣,進行繁殖培養(yǎng);
(4)取液觀察;(a)取液;(b)稀釋菌液;(c)平板培養(yǎng);
(5)分離并檢測;
(6)取液儲存;通過該綜合微生物培養(yǎng)方法簡單可操作性強,培養(yǎng)的綜合微生物均在3代以內,菌類穩(wěn)定不發(fā)生突變,且繁殖快速。
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規(guī)格參數:
產品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
焦曲霉說明書 | Aspergillu | EY-J963620 |
資源名稱: 焦曲霉
種屬: Aspergillus ustus
提供形式: 凍干物
安全等級: 1
模式菌株: no
培養(yǎng)基: 綜合PDA:20%馬鈴薯汁1L,葡萄糖20g ,KH2PO4 3g, MgSO4.7H2O 1.5g,硫胺素微量,瓊脂 15g,pH 自然。
生長條件: 25-28℃,好氧
存儲條件: 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
低溫存法:
①簡單保存法,將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時間不超過1~2個月,若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空并在棉塞上浸蠟,以隔絕外界空氣和水汽,保持時間可達3~4個月;②液氮超低溫保存法,將生長穩(wěn)定期的細胞懸浮在10%甘油或其他低冰點液體中,密封于安瓿管內,然后控制冷卻速度,使安瓿管溫度逐步下降至 -35℃時,即可置于-150~-196℃的液氮罐中保存。大多數微生物如病毒、噬菌體、多種細菌、放線菌、酵母和原蟲、特別是一些用冷凍干燥法有困難的微生物,都可用此法保存。
微生物菌種的培養(yǎng):
⒈ 孢子制備
⑴ 放線菌孢子的制備
一般采用瓊脂斜面培養(yǎng)基,培養(yǎng)基中含有一些適合產孢子的營養(yǎng)成分,如麩皮、豌豆浸汁、蛋白胨和一些無機鹽等。碳源和氮源不要太豐富(碳源約為1%,氮源不超過0.5%),碳源豐富容易造成酸性的營養(yǎng)環(huán)境,不利于放線菌孢子的形成,氮源豐富則有利于菌絲繁殖而不利于孢子形成。一般情況下,干燥和限制營養(yǎng)可直接或間接誘導孢子形成。放線菌斜面的培養(yǎng)溫度大多數為28 ℃,少數為37 ℃,培養(yǎng)時間為5~14天。
⑵ 霉菌孢子的制備
霉菌的孢子培養(yǎng),一般以大米、小米、玉米、麩皮、麥粒等天然農產品為培養(yǎng)基。這是由于這些農產品中的營養(yǎng)成分較適合霉菌的孢子繁殖,而且這類培養(yǎng)基的表面積較大,可獲得大量的孢子。霉菌的培養(yǎng)一般為25~28 ℃,培養(yǎng)時間為4~14天。
⒉ 種子制備
⑴ 搖瓶種子制備
搖瓶種子進罐,常采用母瓶、子瓶兩級培養(yǎng),有時母瓶種子也可以直接進罐。種子培養(yǎng)基要求比較豐富和*,并易被菌體分解利用,氮源豐富有利于菌絲生長。原則上各種營養(yǎng)成分不宜過濃,子瓶培養(yǎng)基濃度比母瓶略高,更接近種子罐的培養(yǎng)基配方。
⑵ 種子罐種子制備
種子罐種子制備的工藝過程,因菌種不同而異,一般可分為一級種子、二級種子和三級種子的制備。孢子(或搖瓶菌絲)被接入到體積較小的種子罐中,經培養(yǎng)后形成大量的菌絲,這樣的種子稱為一級種子,把一級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,稱為二級發(fā)酵。如果將一級種子接入體積較大的種子罐內,經過培養(yǎng)形成更多的菌絲,這樣制備的種子稱為二級種子,將二級種子轉入發(fā)酵罐內發(fā)酵,稱為三級發(fā)酵。同樣道理,使用三級種子的發(fā)酵,稱為四級發(fā)酵。
Advenella│kashmirensis 中文名稱:克什米爾陌生菌Advenella│kashmirensis分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:潛在的有機污染物降解菌/分離自32C烷烴富集菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:97%
Tsukamurella│inchonensis 中文名稱:仁川塚村氏菌Tsukamurella│inchonensis分離基物:樣/表層海提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:潛在的有機污染物降解菌/分離自代十六烷富集菌群;產酶微生物/脂酶(三丁甘油酯)培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:821生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:≥98%
Pelomonas│sp. 中文名稱:污泥單胞菌Pelomonas│sp.分離基物:樣/庫上層樣提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:近海細菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:33生長條件:25℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:≥98%
Alcaligenes│xylosoxidans 中文名稱:木糖氧化產菌Alcaligenes│xylosoxidans分離基物:深海底層樣提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:no應用領域:端微生物/高溫菌(80℃)培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長條件:80℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:96%
Ottowia│beijingensis 中文名稱:北京奧托氏菌Ottowia│beijingensis分離基物:沉積物/表層沉積物提供形式:斜面培養(yǎng)物模式菌株:yes應用領域:模式菌株:;有機污染物降解菌/(潛在的)酚降解菌培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:33生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:96%
Shewanella│upenei 中文名稱:希瓦氏菌(加詞待譯)Shewanella│upenei分離基物:沉積物/表層沉積物提供形式:凍干物安全等級:1模式菌株:no應用領域:潛在的有機污染物降解菌/分離自草甘膦富集菌群培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:≥99.0% metals basis
Thalassospira│xianhensis 中文名稱:仙河海旋菌Thalassospira│xianhensis分離基物:樣/海(-1810m,原位富集1年提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應用領域:有機物降解菌/降解多環(huán)芳香烴及石油(單菌驗證);無機物降解菌/孔雀石綠(單菌驗證)培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:471生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法 純度:≥99.0% metals basis
Trichosporon│japonicum 中文名稱:日本絲孢酵母Trichosporon│japonicum分離基物:生物樣/闊苞菊/葉提供形式:斜面培養(yǎng)物安全等級:1模式菌株:no應用領域:近海酵母培養(yǎng)方法培養(yǎng)基:513生長條件:28℃存儲條件:液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法 純度:≥98%
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