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產(chǎn)品名稱 | 高轉移肺癌細胞;95-D |
生長特性 | 貼壁生長 |
貨號 | EY-X63545 |
細胞名稱 高轉移肺癌細胞;95-D
形態(tài)特性: 上皮細胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 這是一株高轉移肺癌。
培養(yǎng)條件: RPMI1640(w/oHepes)胎牛血清,10%
傳代方法: 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況: PN
凍存條件: 基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 陰性
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產(chǎn)品特點:
1、 使用方便:不需昂貴設備。
2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。
3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。
4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。
5、 含蛋白穩(wěn)定劑,提取的蛋白穩(wěn)定。
6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。
7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括蛋白酶、半酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。
8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。
培養(yǎng)操作步驟 :
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作流程:
1.1主要試劑與儀器:倒置相差顯微鏡(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293細胞的復蘇培養(yǎng)傳代及凍存:
1.2.1 細胞的復蘇培養(yǎng) 從液氮罐中取出凍存管,立即投入37℃水浴,并不斷的搖動,使之迅速融化。 將溶解的細胞凍存管取出,用酒精消毒后打開,吸出溶有細胞的凍存液,加入事先裝好培養(yǎng)液(37℃預熱,8~10倍體積)離心管內(nèi),稍微吹打混勻,然后1000rpm 5min,去除上清,加入適量培養(yǎng)液,吹打成細胞懸液, 以1×105/ml密度接種于25cm2培養(yǎng)瓶內(nèi),在37℃、5%co2及飽和濕度下培養(yǎng)。
1.2.2 細胞傳代 原代培養(yǎng)的hek-293細胞48h換液1次,細胞長至60%~70%融合時,用0.25%消化1~2min,將培養(yǎng)瓶再用手掌輕輕敲打使細胞脫壁、懸浮、分散,為使細胞進一步分散可用吹打管輕輕吹打幾次,獲得細胞懸液,然后加入倍量的培養(yǎng)基,溫和混勻,吸管分裝混合液,傳代擴增細胞。
1.3 細胞形態(tài)的觀察 在倒置顯微鏡下觀察并記錄細胞的生長情況及形態(tài)特征。
1.4 細胞的計數(shù) 常規(guī)消化細胞,待細胞變圓、脫壁并浮起,加入少量培養(yǎng)基離心,再用pbs重懸并吹打制成細胞懸液。在細胞計數(shù)板蓋玻片的一側加微量細胞懸液,用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格細胞數(shù),按公式計算出細胞數(shù)。細胞數(shù)/ml原液=(四方格細胞數(shù)之和/4) ×104。
1.5 細胞的貼壁率 指數(shù)生的細胞,以0.25%消化成單細胞懸液,計數(shù)后分別接種于12個25cm2培養(yǎng)瓶中,每兩小時隨機取出3瓶細胞,吸除培養(yǎng)基及未貼壁細胞,加入胰消化酶消化、計數(shù)已貼壁細胞,取其平均值,按照公式:貼壁率(%)=(已貼壁細胞數(shù)/接種細胞數(shù)) ,計算貼壁率。
1.6 生長曲線 取指數(shù)生的細胞用消化制成單細胞懸液,以1×104/孔接種于24孔板,每孔加入1ml培養(yǎng)基。每天隨機取3孔,計數(shù)每孔細胞的數(shù)目并計算平均值。
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HPS1 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HRP RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Nocardia otitidiscaviarum ijders細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HumanIgM RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Gibberella fujikuroi (Sawada) Wollenweber, ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HumanIgG RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
freeze-dried細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HumanP16 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
freeze-dried細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;IKBKB RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Yarrowia lipolytica (Wickerham et al.) van ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;HPRT RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Lysinibacillus sphaericus細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;IFN-gamma RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;IGF1R RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Tremella fuciformis Berkeley細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;IKBKE RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Aeromonas jandaei Carnahan et al.細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;IL-11 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Saccharomyces cerevisiae Meyen ex E.C. Hans ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;IL-16 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Nodulisporium tuberum Fontana et Bonfante e ..細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;IL-10 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Mus musculus, mouse細胞名稱: 小鼠淋巴瘤細胞;IL-6 RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
freeze-dried細胞名稱: 小鼠雜交瘤細胞;InfluenzaAvirusNucleoprotein RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
Homo sapiens, human細胞名稱: 小鼠L細胞;IL-1a RPMI1640(w/oHepes)10%FBS
高轉移肺癌細胞;95-D人抗糖蛋白抗體(GP)ELISA試劑盒Ratsignaltransduction-Smad1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒Ratsignaltransduction-Smad7ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMAIgA)ELISA試劑盒RattrypsinELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人中性粒細胞彈性蛋白酶(NE)ELISA試劑盒RatvisfatinELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA試劑盒Ratα-GlucosidaseELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人補體因子H(CFH)ELISA試劑盒Ratβ-DefensinsELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人原激活肽(TAP)ELISA試劑盒RBP-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒RBP-4ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。