羅氏沼蝦諾達病毒PCR試劑盒實驗注意事項:
1.基礎程序;
2.擴增溫度和延伸溫度;
3.反應時間;
4.循環(huán)次數(shù);
5.PCR 反應液的配制;
6.PCR技術的基本原理;
7.PCR的反應動力學;
8.PCR擴增產物;
9.PCR反應體系與反應條件。
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以下是羅氏沼蝦諾達病毒PCR試劑盒實驗的詳細說明書:
產品名稱 | 羅氏沼蝦諾達病毒PCR試劑盒實驗 |
英文名稱 | Macrobrachium Rosenbergii Nodavirus(MrNV)RTPCR |
編號 | EY00P776 |
使用方法:
注:羅氏沼蝦諾達病毒PCR試劑盒實驗所有試劑使用前需*解凍,混合均勻,6,000rpm離心數(shù)秒后使用。
1. 樣本處理(樣本處理區(qū))
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等,具體提取方法請參照相關說明書;陽性質控品及陰性質控品無需提取,可直接使用。
2. 擴增試劑準備(PCR前準備區(qū))
取N個(N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品)PCR反應管,每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量,兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s,轉移至樣本處理區(qū)。
2.加樣(樣本處理區(qū))
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl,蓋緊管蓋,于6,000rpm離心10s,轉移至擴增區(qū)。
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CNE-1細胞,高分化鼻咽癌細胞 人卵巢癌細胞,8910PM細胞 人前脂肪細胞-內臟裂解物HPA-v L
EB病毒轉化的絨猴淋巴細胞;B95-8
IDS Others Human 人 Iduronate 2-Sulfatase / IDS 人細胞裂解液 (陽性對照)
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mRTEC, 小鼠腎小管上皮細胞
人成纖維母細胞-新生兒(HDF-n)( 5×105 )
人口腔表皮樣癌細胞;KB 大鼠尿道上皮細胞*培養(yǎng)基 100mL
人惡性黑色素瘤細胞;A-375 [A375]
DLL1 Others Mouse 小鼠 DLL1 / Delta-1 人細胞裂解液 (陽性對照)
羅氏沼蝦諾達病毒PCR試劑盒實驗MuM-2C 人眼脈絡黑色素瘤細胞
MV3 人黑色素瘤細胞
MX-1 人癌細胞
NAMALWA 人Butt`s淋巴瘤細胞
需要自備的器材:
1.羅氏沼蝦諾達病毒PCR試劑盒實驗儀器:分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器(2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL)。
2.耗材:熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯(DEPC)水
處理的滅菌離心管、吸頭(10 µL、200 µL、1000 µL)、滅菌雙蒸水。
特點:
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準確快速。
2. 引物經過優(yōu)化,特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗結果。