兔痘病毒PCR試劑盒步驟注意事項：
1．基礎程序；
2．擴增溫度和延伸溫度；
3．反應時間；
4．循環(huán)次數；
5．PCR 反應液的配制；
6．PCR技術的基本原理；
7．PCR的反應動力學；
8．PCR擴增產物；
9．PCR反應體系與反應條件。

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以下是兔痘病毒PCR試劑盒步驟的詳細說明書：

使用方法：
注：兔痘病毒PCR試劑盒步驟所有試劑使用前需*解凍，混合均勻，6,000rpm離心數秒后使用。
1. 樣本處理（樣本處理區(qū)）
待檢樣本的核酸提取可采用病毒RNA提取試劑盒或自動化核酸提取儀等，具體提取方法請參照相關說明書；陽性質控品及陰性質控品無需提取，可直接使用。
2. 擴增試劑準備（PCR前準備區(qū)）
取N個（N=陰性質控品+待檢樣本+陽性質控品）PCR反應管，每管分別加入FMD RT-PCR反應液19μl、RT-PCR酶1 μl (也可根據每頭份用量計算N+1份FMD RT-PCR反應液、RT-PCR酶所需總量，兩者混勻離心后分裝20 μl至單個PCR反應管)。
組分每頭份用量FMD  RT-PCR反應液19 μlRT-PCR酶。
1 .將所有PCR反應管于6,000rpm離心30s，轉移至樣本處理區(qū)。
2.加樣（樣本處理區(qū)）
3.在上述的PCR反應管中分別加入待檢樣本RNA提取物、陰性質控品和陽性質控品各5 μl，蓋緊管蓋，于6,000rpm離心10s，轉移至擴增區(qū)。

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 雜交瘤(B類);Z1510A2G6A2F8

DDR1 Others Mouse 小鼠 DDR1 Kinase / MCK10 / CD167 人細胞裂解液 (陽性對照)

LLC 小鼠肺癌細胞

HBL-100人整合SV40基因的上皮細胞 HBL-100 iegration of SV40 gene in breast epithelial cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS

SHH Protein Human 重組人 SHH / Sonic hedgehog 蛋白 (aa 1-197, His 標簽)

人成纖維細胞;HFF Hepa 1-6, 小鼠肝癌細胞 Mouse

人星形膠質細胞 Human

CM-R104大鼠腦膜細胞*培養(yǎng)基100mL

7130 人絨毛間葉成纖維細胞(HVT)( 5×105 )

小鼠胚胎成纖維細胞;BALB/C 3T3 小鼠骨髓基質細胞*培養(yǎng)基 100mL

野生型人c-kit受體細胞株;A7d

CD9 Others Human 人 CD9 / Tspan-29 人細胞裂解液 (陽性對照)

MCF-7（MCF7）（ATCC來源）, 人癌細胞

MDA-MB-231（ATCC來源）, 人癌細胞

Raji，人Butt's淋巴瘤細胞

Saos-2，人成骨肉瘤細胞

靛基質試驗用培養(yǎng)基  英文名稱；  Indole Test Medium  規(guī)格；  250g

酵母菌、霉菌、念珠菌、青霉、曲霉檢驗培養(yǎng)基  英文名稱；    規(guī)格； 

察氏瓊脂  英文名稱；  Czapek Dox Agar  規(guī)格；  250g

產毒培養(yǎng)基  英文名稱；  Toxin-Producing Medium  規(guī)格；  250g

高鹽察氏瓊脂  英文名稱；  Salt Czapek Dox Agar  規(guī)格；  250g

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）顆粒  Potato Dextrose Agar  300ml/袋*10

李氏菌增菌肉湯（LB1,LB2）基礎顆粒  Listeria Enrichment Broth Base  225ml/袋*10

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液顆粒  Lactose Peptone Broth  300ml/袋*10

LB肉湯顆粒  LB Broth  300ml/袋*10

改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基顆粒  Martin Agar Medium, Modified  250g

兔痘病毒PCR試劑盒步驟察氏瓊脂  用于青霉,曲霉鑒定及保存菌種用(GB標準)用途:用于青霉、曲霉鑒定及保存菌種用。成分(g/L)鈉 3.0 1.0鎂 0.5 0.5亞鐵 0.01蔗糖 30.0瓊脂 15.0用法稱取本品 50.0g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,分裝后 116℃高壓滅菌 20 分鐘,備用。注明：高壓滅菌后有沉淀物。

產毒培養(yǎng)基  用于青霉,曲霉的產毒培養(yǎng)用途:用于青霉、曲霉的產毒培養(yǎng)。成分(g/L)秈米 250.0用法稱取本品適量,分裝試管或三角瓶,121℃高壓滅菌 15 分鐘,備用。

高鹽察氏瓊脂  用于霉菌和酵母菌的計數(GB標準)用途用于霉菌和酵母菌的計數。成分（g/L）鈉 2.0g 1.0g鎂 0.5g 0.5g亞鐵 0.01g蔗糖 30.0g氯化鈉 60.0g瓊脂 20.0g※請放置陰涼干燥處保存用 法稱取本品11.4克，加熱溶解于100ml蒸餾水中，115℃高壓滅菌20分鐘，備用。質量控制和典型特征接種10-100個霉菌于28℃培養(yǎng)48-96小時應生長良好。

玉米粉瓊脂  用于真菌培養(yǎng)用途:用于真菌的培養(yǎng)及鑒定。成分(g/L)玉米浸粉 7.0瓊脂 15.0pH值6.0 ± 0.2 25℃用法稱取本品 22.0g,加熱溶解于1000ml 蒸餾水中,121℃高壓滅菌 15 分鐘,備用。

需要自備的器材：
1．兔痘病毒PCR試劑盒步驟儀器：分析天平、離心機、熒光 PCR 擴增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調移液器（2 µL、20
µL、200 µL、1000 µL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的滅菌離心管、吸頭（10 µL、200 µL、1000 µL）、滅菌雙蒸水。
特點：
1.即開即用，用戶只需要提供樣品 DNA 模板，操作簡單，定量準確快速。
2. 引物經過優(yōu)化，特異性強。預期的 PCR 產物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照，便于分析試驗結果。