實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
公司細(xì)胞廣泛用于國內(nèi)院校的細(xì)胞生物學(xué)研究,作為實驗項目研究。下列產(chǎn)品詳細(xì)介紹:
產(chǎn)品名稱 | 生長特性 | 貨號 |
棕果蝠肺成纖維細(xì)胞;FFBL3 | 貼壁生長 | EY-X63741 |
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細(xì)胞名稱 棕果蝠肺成纖維細(xì)胞;FFBL3
形態(tài)特性: 成纖維細(xì)胞樣
生長特性: 貼壁生長
特征特性: 該細(xì)胞系來源于一雌性棕果蝠的肺組織。2005年由中國科學(xué)院昆明細(xì)胞庫建立。
培養(yǎng)條件: DMEM-H:Dulbecco'sModifiedEagle'sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS
傳代方法: 1:2傳代;3-4天一次
傳代情況: P2
凍存條件: 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測: 熒光法(-)
冷凍保存細(xì)胞之方法
冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 儲存。
冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase儲存。*-20 ℃不可超過1 小時, 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作步驟:
1、貼壁細(xì)胞的消化
①吸除培養(yǎng)液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量 源葉生物 Trypsin-EDTA solution,略蓋過細(xì)胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細(xì)胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細(xì)胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變
化;或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來,吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液,吹打下細(xì)胞,即可直接用于后續(xù)實驗。
④如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長,未及吹打細(xì)胞,細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落, 直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細(xì)胞,盡量去除細(xì)胞消化液后,加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,即可用于后續(xù)實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
(2S)-Pinocembrin 7-O-[2''-O-(5'''-O-trans-cinnamoyl)-β-D-apiofuranosyl]-β-D-glucoside
CAS No.:773899-29-9
中文名:
分子式:C35H36O14
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CIDE B DNA斷裂因子相似蛋白B抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml LAsarinin
DNase I 脫氧核糖核酶1抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Gitogenin
DNase II 脫氧核糖核酶2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Isoliquiritigenin
DNase gamma 脫氧核糖核酶γ抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Isoliquiritigenin
TIP30 TIP30蛋白抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Ginsenoside Re
AMID/AIFM2 線粒體凋亡誘導(dǎo)因子2抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Ginsenoside F4
ATAD5 染色體脆弱性相關(guān)基因抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Ginsenoside RK3
BAT3/BAG6 Bcl2相關(guān)抗凋亡基因6抗體 現(xiàn)貨供應(yīng) 0.2ml Ginsenoside RH4
月桂卓 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Azone 含量:AR,99.5%
月桂基磺 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Sodiumdodecanesulfonate 含量:色固,80%
月桂基*基銨 進口、國產(chǎn) 英文名稱:DTAC 含量:高純,60%
月桂?;溠刻擒?/font> 進口、國產(chǎn) 英文名稱:DDM 含量:高純,98%
蕓苔素內(nèi)酯 進口、國產(chǎn) 英文名稱:24Epicastasterone 含量:試劑級,98%
藻紅 進口、國產(chǎn) 英文名稱:PyrosineB 含量:ACS
藻朊 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Sodiumalginate 含量:超純,99%
藻朊 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Alginicacid 含量:超純,99%
皂苷 進口、國產(chǎn) 英文名稱:Saponin 含量:CP,98%
增塑劑DIBP 進口、國產(chǎn) 英文名稱:DIBP 含量:BR,98%
棕果蝠肺成纖維細(xì)胞;FFBL3藥敏紙片規(guī)格:5μg/片,20片/瓶用途:抗菌藥體外敏感試驗。
HC瓊脂基礎(chǔ)規(guī)格:250g用途:用于O157菌檢測
變形桿菌成套生化鑒定管(BXWS)規(guī)格:13種*1套/盒*10盒用途:用于變形桿菌的生化鑒定。組成:尿素酶1支、丙氨酶1支、西蒙氏枸櫞鹽1支、鳥氨脫羧酶1支、氨基脫羧酶對照1支、明膠生化管1支、脂酶(玉米油) 1支、D-1支、色氨肉湯1支、麥芽糖1支、木糖1支、水楊苷1支、七葉苷水解1支、無菌液體石蠟1支。
大腸菌群培養(yǎng)基(日本)規(guī)格:250g用途:用于大腸菌群的固體平板檢測
2×YT肉湯規(guī)格:250g用途:用于基因工程菌大腸桿菌培養(yǎng)
綠膿菌素測定培養(yǎng)基(PDP)規(guī)格:BR250g詳情介紹